Test ELISA
I. Définition de la technique ELISA :
ELISA : abréviation d’Enzyme Linked Imminosorbent Assay
ELISA : c’est une technique d’analyse biochimique utilisée pour détecter la présence d’un anticorps (Ac) ou d’un antigène (Ag) dans un échantillon.
C’est un outil très simple et très sensible, utilisé en médecine, phytopathologie, et le control de qualité dans plusieurs industries.
L’élément à analyser est souvent fixé à un support solide dit plaque de titration ELISA, il s’agit d’une plaque renfermant plusieurs puits ou se déroule l’ensemble de réactions
II. Principe de la technique ELISA :
1. Déposer les échantillons dans les puits de la plaque de titration
2. Ajouter l’Ac conjugué à un enzyme
3. Incubation pendant une durée bien déterminée à température ambiante
4. Laver les plaques de titration par de l’eau d’ionisée
5. Ajouter un substrat chromogène et incuber le tout pendant une période bien précise
6. Ajouter une solution d’acide dilué pour stopper la réaction et lire au spectrophotomètre
III. Les étapes et les composantes générales d’une ELISA :
Les principales étapes et composantes nécessaire pour la réalisation de cette techniques sont :
1. La plaque de titration qui doit répondre à certains caractéristiques comme un haut niveau d’adsorption des protéines, et avoir un fond plate
2. L’étape de tapissage des puits par l’Ac ou l’Ag
3. Temps d’incubation pour permettre aux réactions (Ac_Ag, Enzyme_substrat) de se faire correctement
- moins de temps implique des réactions incomplètes
- plus de temps pourrait affecter la sensibilité des anticorps
4. Les lavages pour éliminer les Ac ou les Ag en excès et qui ne se sont pas agglutinés
- un lavage doux : les Ac ou Ag en excès reste dans le puits et on obtient de faut résultats
- un lavage agressif : affecte l’interaction entre Ac et Ag
6. L’Ac conjugué ou l’Ag conjugué : on les appelle ainsi du fait qu’ils sont marqués par un enzyme (liés de manière covalente) qui permettrai par la suite de nous donner une idèe sur la concentration de l’analyse
Parmi les enzymes utilisés pour le marquage des Ac et des Ag :
- Peroxydase du radis
- Phosphatase alcaline
- B-galoctosidase
- Urease
7. Substrat chromogène, c’est composé chimique après transformation par l’enzyme de marquage donne naissance à un produit coloré qui peut être quantifié par spectrophotomètre
8. Solution d’arrêt de la réaction entre enzyme lié à l’Ac ou à l’Ag et le substrat chromogène
9. Un tampon de lavage et un tampon de dilution des extraits